日本小叶常春藤组织培养

2020-09-23

“ 春天是什么颜色的?啊!春天--春天是彩色，金黄的水仙花，娇黄的迎春花，火红的太阳，粉红的桃花，青山绿水，蓝天大海……”想信你在阅读的过程中随处可见有关花的句子，花它可以让我们的心情顿时高兴起来！要侍弄好花草并不是一件简单的事，种植达人有哪些经验和技巧呢？鲜之花网小编特地为大家精心收集和整理了“日本小叶常春藤组织培养”，供大家借鉴和使用，希望大家分享！

日本小叶常春藤为常春藤属中耐寒性较强的品种，植株生长健壮，茎叶浓绿，节间短粗，组织充实，露地越冬性能良好，在笔者所在的扬州地区已经受了－10℃至－15℃的低温考验。霜后茎叶略披红晕，为不可多得的冬绿型垂直绿化材料，具有很好的推广应用前景。采用茎节、叶片为外植体，进行组织培养无性系快繁，可有效解决生产应用过程中种源稀少、养殖速率低的矛盾。

材料与方法

采用多年生日本小叶常春藤一年生茎枝的茎节和叶片为外植体。茎节外植体初代培养，材料截成厚0．5厘米的小段，叶片外植体切为0.4×0.5厘米的方块。培养温度25℃，光照强度2000lx，光照时间每天12小时。

技术及应用

茎节外植体带菌度较高，但组织发育充实，故以中等强度灭菌剂处理为好，即70％酒精0.5分钟＋0.1％升汞10分钟，污染率为29.2％。若将0.1％升汞处理时间增加至15分钟，虽污染率下降至12.5％，但杀伤率将上升，总体存活率反而会下降，故不宜采用。茎尖外植体因其组织幼嫩，试验中虽使用最低强度5％的次氯酸钠处理15分钟，褐变死亡率仍高达72.9％；再降低灭菌强度，虽死亡率可以下降，但污染率又上升，在实际操作中较难掌握，故外植体的选用以茎节为宜。

初代培养效应与取材时期密切相关。4月初正值露地栽培植株萌芽期，接种后外植体萌发率最高，达82.4％；5月上旬取用的为当年萌生新梢，材料带菌度低，故接种后污染率最低，为20.1％；7月底进入高温多湿的梅雨季节，外植体带菌度急剧上升，灭菌困难，材料污染率上升，高达89.4％。故日本小叶常春藤的茎节组织培养，外植体取用时间以4月初到5月上旬为宜。

组织培养中，生长素和细胞激动素的添加，均以低浓度为宜。初代培养基以6－BA1.0毫克／升－1＋2.4－D0.1毫克／升－1为好，诱芽率可达90.5％，显著高于其他处理。诱芽生长量达1.2厘米，呈极显著变异水平。继代增殖培养，在6－BA1毫克／升－1水平，生长素配比量仍以低水平为宜，生长素类别以NAA优于2.4－D，试验范围内以MS＋6－BA1.0毫克／升－1＋NAA0.01毫克／升－1的增殖系数为高。

叶片愈伤组织诱导培养，接种3天叶片卷曲增厚。这不仅和6－BA／NAA相对比值有关（1∶3＞1∶2＞1∶1），且和其绝对用量水平紧密相关，综合试验结果以MS＋6－BA1.0毫克／升－1＋NAA3.0毫克／升－1时最高，达82.4％。

茎节培养过程中，经多次继代养殖，发现有皱叶性状变异的个体出现。同样的性状变异，在其他常春藤物种中有选育成新品种的应用范例，若能将变异性状加以分离、固定，并扩大养殖，在提高其观赏特性上具良好的应用前景，不失为一条途径。若能将组织培养技术和辐照诱变等育种手段相结合，则对常春藤育种研究有很大帮助。推荐阅读：红花继木的组培技术根雕—狂飙中华奇石神仙舞曲

xZh52.CoM展读推荐

花卉的组织培养

花卉繁殖，可分有性繁殖（种子繁殖）和无性繁殖（营养器官繁殖），而近来有不少种花卉已采用组织培养手段，这是一种新的常规繁殖方法。

用组织培养的方法进行繁殖是一项先进技术，可用极少量的繁殖材料，繁殖大量的植株，并可得到去病毒的壮苗，这在某些花卉的商品生产中已成为极有效的繁殖手段。

组织培养早在20世纪初即已开始，已有80多年的历史。近年发展很快，并广泛用于花卉登殖，现在由琼脂培养转向液体培养，即用发酵罐深层培养，形成微繁殖工业。目前又在研究人造种子，把用微繁殖技术形成的不定胚和芽条用球形胶囊包裹起来，形成人造种子。这种人造种子能在适宜条件下，生长发育成植物体。但这项技术还有很多问题需要进行研究。

1．培养基和培养条件

（1）培养基成分

培养基的成分主要包括无机盐类（分大量元素和微量元素）、有机物质（即维生素等）、车长调节物质以及碳源等四大类：

①无机盐类：植物所需的十大元素，除碳、氢、氧由水和空气中供给外，其他氮、磷、焊、硫、钙、镁、铁等七种均需加到培养基中；微量元素有硼、锰、锌、钥、钻、碘、铜等。

②有机物质：主要是维生素和氨基酸，如民和民以及烟酸等。

③生长调节质：主要有细胞分裂素和生长素两类。目前用得较多的细胞分裂素有：激动素、玉米素乃及异戊烯基腺嘌吟等，能促进芽的分化；生长素有吲跺乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸，能促进生长。

④碳源：因组织培养时植物体处于他养情况下，故必须有能源供给，主要是蔗糖。

（2）培养基的种类

培养基的种类很多，采用哪一种培养基，对于培养是否成功有很大的关系，在1950～19舰年初常采用White培养基，但后来有很多新的培养基，其中Ms是Murashige和skoog1962； ER是Erikssonl965； B5是Gambor等1968； SH是shenk和Hildebrandt l972； HE是Heller1953提出来的，见表1表2。

这些培养基中MS培养基应用最广泛。ER培养基与MS培养基相似。B5培养基在愈伤组织和悬浮培养方面做了不少试验，对有些植物很适合，SH培养基与B5相似。HE培养基为欧洲许多实验室所用，但矿物盐浓度稍低，应用范围不太广。在花卉组织培养中用MS培养基最多。

（3）引培养条件

培养条件，按培养对象的种类不同而有所不同，温度条件一般在23～26℃左右的恒温条件下。光照条件对器官形成有作用，一般范围是1000～3000勒克司，每日12～16小时，高于3000勒克司有强烈抑制作用。培养室要求清洁卫生，减少污染。

2.花卉组织培养的途径

在花卉组织培养实践中，用植物的组织或细胞培养成植株，也就是试管培养，可以通过三条途径。

（1）通过器官发生

通过由培养的组织，产生芽及根，器官发生由于培养材料的不同又可分为两方面：一是培养花卉植物的茎尖产生大量芽，再将芽分离转移培养成植株；二是培养花卉植物器官外植体产生不定芽，发育成植株。

（2）通过煎伤组织分化成株

将花卉植物体的一小片组织培养成愈伤组织，再诱导分化成芽和根，成为完整植株。

（3）通过胚状体发主

由培养的植株产生愈伤组织，再通过悬浮培养，或直接产生大量的胚状体，再发育成完整植株。

3．花卉组织墙养的操作方法

花卉组织培养的操作可分为培养基配制、消毒灭菌、接种、培养等几方面。

（1）培养墓配制

选定培养基以后，需把大量元素、微量元素、有机物都配成母液，扩大倍数为稀释液，贮存备用。使用时，根据所需配制的量，在稀释液中加一些肌醇、水解酪蛋白、蔗糖等，再加铁盐（需用乙二胺四乙酸二钠（Na2一EDTA）加硫酸亚铁配制成螫合铁）成营养液，然后吸取需用量，加入培养基中，再测其酸碱度（一般pH值在5．5～6．5之间即可），最后加琼脂煮沸后分装入三角瓶或试管中，封口待用。

（2）消毒灭菌

消毒灭菌非常重要，关系到组织培养的成败。污染的途径是器皿、用具、材料的带菌，以及接种室的空气、墙壁、地板等的不清洁，故必须针对所提及的几方面，进行严密的消毒灭菌。

①培养基消毒：将配制分装好培养基的三角瓶或其他容器放入高压灭菌锅中，在15磅／英寸2的压力下，经20分钟高压灭菌即可。

②器皿与用具的消毒：接种用具及玻璃器皿、洗涤材料用的无菌水，用牛皮纸包好后和培养基一起放在高压灭菌锅中消毒灭菌。

③接种室消毒：接种室的地面及墙壁，在接种前后均要用1 ：50的新洁尔敏湿性消毒，每次接种前还要用紫外线灯照射消毒30～60分钟，并用70%的酒精，在室内喷雾，以净化空气，最后是超净台台面消毒，可用新洁尔敏擦袜及70%酒精消毒。

④材料处理及消毒：花卉组织培养取嫩茎、花托、叶柄、叶片均可，取得材料后，需先清理，去掉多余部分，然后冲洗、洗涤剂洗涤、漂清后放入接种室或超净台上，用70％的酒精浸泡半分钟，进行表面消毒，再在10％的漂粉溶液中消毒10分钟左右，取出后用无菌水冲洗4～5次，即可接种。一般材料的选择以幼嫩部分为好。草花用嫩茎、花托为好；球根花卉用茎顶、鳞茎盘、鳞叶等为好。

（3）接种

接种用的钳子、解剖刀、接种针等均需在火焰上消毒后用，用后再消毒。将消毒好的材料置于培养皿中，用解剖刀切去其边缘，再切成小块接种在培养基上，使组织块与培养基密合，不得将材料陷于培养基中，接好后随即将瓶口封好待培养。

（4）培养

接种完毕后即可置于培养室，在恒温、加光条件下进行培养，培养一段时间后，根据情况将材料从诱导愈伤组织的培养基转到分化培养基（也有只用一种培养基就可直接诱导分化成绿苗的），最后转移到生根培养基上。

（5）试管苗移栽

试管苗发根后，必须随即转移到栽培基质中去，这种基质可以用培养土、蛭石、珍珠岩等配成。将试管苗从瓶中耿出，洗去残存的培养基，移植到准备好的基质中去，随即用细喷壶喷水后加玻璃或塑料罩，3～4日内不必浇水，以后浇些清水，1周后见苗已挺直，可去罩浇培养液（过去所用培养基的大量及微量元素减半配成），以利生长，2～4周后可进行常规栽培。

花卉组织培养技术

1、花卉组织培养的应用价值

花卉组织培养，就是分离花卉植物体的一部分，如茎类、茎段、叶、花、幼胚等，在无菌试管，并配合一定的营养、激素、温度、光照等条件，使其产生完整植株。由于其条件可以严格控制，生长迅速，1-2个月即为一个周期，因此在花卉植物的生产上有重要应用价值。

快速大量繁殖方面：对一些难繁殖的名贵品种花卉及一些短期内大量急需生产的花卉，应用很广。兰花、菊花、唐菖蒲等花卉利用腋芽增生，短期得到大量植株。非洲紫罗兰可通过叶片，水仙可通地鳞片，诱导产生不定芽，来达到大量繁殖的目的。

花卉育种方面：百合、鸢尾等许多花卉可以进行远缘杂交，由于生理代谢等方面的原因，常使杂种胚早期败育，因而得不到杂种植物。而在试管中进行胚培养，可使其顺利生长，得到远缘杂种。此外还可采用愈伤组织诱变、花粉培养等多种方法，来进行花卉育种。

培育无病毒苗方面：菊花、唐菖蒲、水仙、郁金香、大丽花等一大批花卉靠无性繁殖法繁殖，病毒逐代传递积累，危害日趋严重。而分离花卉植物0.1-0.5毫米大小的生长点，培养得到的基本上是无病毒苗。因此这一技术已在花卉无病毒苗的培育中广泛应用。

2、花卉组织培养对实验室及设备的要求

花卉组织培养是在人工控制的条件下培养花卉，是一种花卉现代工厂化生产新技术，所以其对实验室及设备有一定的要求。

实验室方面

①化学实验室：主要承担配制培养基的任务。要求具有各种化学药品试剂、各种玻璃器皿、称量天平等。

②洗涤室：主要进行玻璃器皿的洗涤，要求有自来水装置，同时有烘箱，以便洗后烘干。

③灭菌室：主要进行培养基和用具的消毒。要有高压灭菌锅，具有水源和电源。

④接种室：是花卉材料分离、消毒接种和转移的场所。要求密闭、清洁、整齐、装有紫外灯，能随时灭菌。有的也可用接种箱或超净工作台代替。

⑤培养室：是花卉材料培养生长的地方。要求清洁，保温好，室温均匀一致，并有绝热、防火性能。

设备方面

①天平：供配制培养基时称量药品和激素用。大量元素用普通天平；微量元素和激素用分析天平。

② 酸度计：测定培养基的pH用。

③高压灭菌锅：是供培养基和器械用具灭菌用。

④烘箱：洗净的玻璃器皿干燥灭菌用。

⑤蒸馏水制造装置：得到纯净水供培养用。

⑥冰箱：供贮放母液和植物材料用。

⑦接种箱或超净工作台：为植物材料接种或转移的操作场所。

⑧空调机：控制室温用。

3、花卉组织培养对培养基的要求

培养基是花卉植物组织培养中十分重要的基质，目前应用的有好多种，但其主要成分大体相同，主要成分是水，其他还有大量元素、微量元素、维生素、生长调节物质、蔗糖和琼脂等。

目前花卉组织培养中应用最多的为MS培养基。其组成是在配制1升（1000毫升）培养基时，加硝酸铵1.65克、硝酸钾1.9克、氯化钙0.44克、硫酸镁0.37克、磷酸二氢钾0.17克、碘化钾0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸镁22.3毫克、硫酸锌3.6毫克、钼酸钠0.25毫克、硫酸铜0.025毫克、氯化钴0.025毫克、硫酸铁27.8毫克、蔗糖30克和琼脂7克。其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而确定。MS培养基中大量元素浓度过高，为此常采用1/2、1/4大量元素浓度作培养用，这样生长效果列好。

配制培养基前要准备好三角瓶、试管、烧杯、量筒、吸和等玻璃器皿，预先称好药品。配制时先将琼脂溶化，再加入在水中深解的各种营养元素和蔗糖，然后用氢氧化钠或盐酸调整培养基的pH，一般掌握在5.7左右。以后可分注到养瓶中，盖好瓶盖。培养基配好要经高压灭菌。冷却后放到培养室预培养3天，如没有杂菌污染，才可进行花卉材料的接种。

4、花卉组织培养的过程

花卉植物组织培养即无菌培养，也就是要求培养的材料不带有杂菌。从田间或温室等地切取花卉材料时，应选择健壮无病虫母株，取幼嫩、分生能力强的部位，以利生长。

取来的材料虽经选择，外部总还有不少杂菌。为此，接种前应进行表面灭菌。通常先用自来水冲洗十几分钟，有泥的应刷去。冲洗干净后，用70%的酒精浸泡10-15秒钟消毒。接着用无菌水（经高压灭菌的蒸馏水）冲洗两次，再用10%的漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒，最后用无菌水冲洗3-4次。带有茸毛不易湿润消毒的材料可加些洗衣粉。上述操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件进行。经过表面灭菌的材料，用无菌滤纸将水吸掉。再用解剖刀切取所需部位，通常几毫米大小，培育无病毒苗则应在1毫米以下，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到培养瓶上培养。工具用完即应在95%酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具带菌造成交叉污染。操作时应穿工作服、戴工作帽，事先洗净手，后再用酒精棉擦试一遍。

5、花卉组织培养材料的培养和移植

花卉材料接种后放到培养室培养。培养室是花卉材料培养生长的场所，一般几到十几平方米皆可。高度约2米左右，空间小，可节省控温能源。培养材料放在培养架上培养。培养架可有木材或金属制成，有4-5层，每层高40-50厘米，日光灯装在上方。架长1.2米左右，与40瓦日光灯长一致，宽80-90厘米。每一层可装两支日光灯，这样培养时的照度约为3000勒克斯。培养室的温度大多采取昼夜恒温培养，保持在25℃±2℃，也有采取昼夜变温培养的，夜晚温度可低些，这应根据花卉生长需

要而定。每天日光灯照明12-16小时。

花卉试管苗由于人工提供各方面优越条件，一般生长发育好，根系也多，可往往由于没掌握其特性，造成移栽时成活率不高。这是因为试管苗在瓶中湿度很高的条件下培养，人为提供蔗糖等碳源，花卉材料是处一起异养生活状态，可以说比温室生长的花卉还要娇嫩得多。而突然从瓶中移到土壤让其过自养生活，往往由于变化太剧烈而造成损伤甚至死亡。为此，花卉试管苗开始移出时，仍应罩上玻璃瓶，或盖上薄膜袋（上开几个小孔），1周后去掉。有喷雾条件则更理想。开始7-10天要遮荫，以后逐渐见阳光。移植基质以沙与蛭石各半为好，要排水、通风好，隔一天浇一次营养液。这样逐步锻炼，让其适应环境。2-3周后经驯化锻炼苗即可移至培养土中栽植。

玫瑰的组织培养

外植体选取从生长在田间或盆栽的优良品种植株上，选取生长健壮、无病虫害的当年生枝条的茎尖和幼茎。取材最好在晴天正午，并且取用植株上部的幼茎。阴雨天或靠近地面的幼茎，表面污染较为严重，难于消毒。玫瑰除用茎尖和幼茎做外植体外，也可以用叶片、叶柄、根、茎、原生质体、胚、花药、子房、花萼和花托做外植体。

消毒灭菌及无菌苗的建立取玫瑰外植体，用5%～10%的次氯酸钠浸泡10～30min或用01%～02%的HgCl浸泡5～15min。用无菌水清洗7～10次后接种。也可先用75%的酒精浸泡20～30s再采用上述方法消毒。消毒灭菌完毕后，将幼茎切割成05～10cm长的至少带有一个节的切段，接种于培养基中。

花叶常春藤

常春藤亦名长春藤，别名洋爬山虎，为五加科、常春藤属常绿小型藤本花木。枝蔓细软而柔韧，节间长，茎节部多发气根，蔓梢部呈螺旋样生长，能攀缘在其他物体上。叶互生，具长柄，全缘或具掌状三至五浅裂。枝蔓生长分营养枝和花枝两样。花枝上的叶片呈卵形或菱形。花小，两性，伞房花序。果实小球形，黑色。同属植物有西洋常春藤、日本常春藤等，分布于亚洲、欧洲及北美洲。

花叶常春藤为常春藤中的变种。常见在一片叶上具墨绿、水绿、石青和乳白，底色暗含粉晕，颇具中国水墨画的神韵气概，变化多端，绚烂多彩，有上百个园艺品种，大部原产西欧。性喜气候温和及疏荫环境，特别适合家庭莳养，为室内优良观叶植物。适生温20℃至25℃，不耐严寒酷暑，对土壤要求不严，而以含腐殖质、疏松、肥沃、中性或微酸性沙质培养土最好，盆土应经常湿润，忌干旱。

花叶常春藤主要扦插或压条繁殖。宜在春秋季剪取1年生带有气根的健壮嫩枝，截成3个至4个茎节一段扦插育苗。老枝扦插成活率低，生长缓慢且多不具攀缘性。扦插基质可用草炭土或腐叶土与素面沙土或蛭石各半掺匀。插穗入土1／3，上罩薄膜保温保湿，约3周左右即可生根分栽。生长旺季可按常规压条，或剪取气生根旺盛的茎段，直接栽植土中即可成苗。家庭养花可在室温20℃以上时剪取1年生新嫩茎段用清水瓶泡生根，茎段下端入水1／3，每日宜换同室温水一次，约2周后生根即可栽植。

花叶常春藤叶色绚烂多彩，多作盆栽，或垂盆置于橱顶高架，或吊挂窗前、阳台檐口，或攀缘于花柱，都有很好的装饰和观赏效果。花叶常春藤对光照要求不严，只要有明亮的散射光，不过于荫蔽，可终年在室内生长。高温酷暑期应注意通风降温，喷水（雾）保持盆土及环境湿润，严寒冬季室温不可低于5℃，土壤腐殖质丰富无需经常施肥，在生长旺季看植株长势，可追施一两次微量复合化肥。室内经常保持通风，空气清新湿润，防避烟尘污染及介壳虫、红蜘蛛侵害。

常春藤的介绍

常春藤又叫常常青藤。常春藤是一种适合于美化家居的植物，是一种颇为流行的室内大型盆栽花木，尤其在较宽阔的客厅、书房、起居室内摆放，格调高雅、质朴，并带有南国情调。它形优美、规整、世界著名的新一代室内观叶植物。可以净化室内空气、吸收由家具及装修散发出的苯、甲醛等有害气体，为人体健康带来极大的好处。要更深地了解常春藤，就要从以下几个角度看：1、品种繁多。常春藤的品种有中华常春藤、日本常春藤、金心常春藤、西洋常春藤、加拿列常春藤常绿藤本、革叶常春藤、银边常春藤、克里木常春藤和冰雪常春藤等，其中数量居多的是中华常春藤、日本常春藤、彩叶常春藤、金心常春藤、银边常春藤。2、绿化用途在庭院中可用以攀缘假山、岩石，或在建筑阴面作垂直绿化材料，在自己家的花园看到一片绿色，生气勃勃的景象，除了养眼之余，还令自己有心旷神怡的感觉，常春藤最美丽之处在于它长长的枝叶，只要将枝叶进行巧妙放置，就能带给人一场视觉盛宴;也可盆栽供室内绿化观赏用，吸收室内的二氧化碳，常春藤能吸收有害物质，并将之转化为无害的糖分与氨基酸，有效抵制尼古丁中的致癌物质，释放出新鲜的氧气，可谓功不可没3、药物学上，它祛风利湿，活血消肿，平肝，解毒等作用;而在生物学上也有当做药材的作用，怀状鉴别茎呈圆柱形，长短不一，直径1-1.5cm，表面灰绿色或灰棕色，有横长皮孔，嫩枝有鳞片状柔毛;质坚硬，不易折断，断面裂片状，黄白色。叶互生，革质，灰绿以，营养枝的叶三角状卵形，花枝和果枝的叶椭圆状卵形、椭圆状披地形。花黄绿以。果实圆球形，黄色或红色。气微，味涩。4、养殖方法常春藤可采用扦插法、分株法和压条法进行养殖。除冬季外，其余季节都可以进行，而温室栽培不受季节限制，全年可以养殖。扦插法：适宜时期是4～5月份和9～10月份，切下具有气生根的半成熟枝条作插穗，其上要有一至数个节，插后要遮荫、保湿、增加空气湿度，3～4周即可生根。匍匐于地的枝条可在节处生根并扎入土壤，因此，用分株法和压条法都可以养殖常春藤。

常春藤如何扦插？常春藤的基本扦插方法

常春藤是一种藤蔓性的，外形像枫叶，生长的速度也不是很快，但总能给人一种充满生命力和精力旺盛的感觉，常常摆放在家中宽敞的地方，富有情调。常春藤如何扦插？常春藤的基本扦插方法

像常春藤这种生命力很旺盛的藤蔓植物，还是很容易就能养活的。常春藤对环境的要求不会很高，但是，如果我们对它多一点照顾，它就会长得更加的茂盛。扦插好常春藤，还得要掌握一些基本方法才行

常春藤的插穗选择，在健康没有病害的枝条上，截取30厘米长的一段，从顶端开始，截成三节，可以扦插成三枝。将常春

藤剪成约八九厘米长的小段，注意一定要用剪刀，不能用手掐，否则会损伤断口处的植物组织，将底部的叶子也剪除,精选

几条完好叶片的。

准备几个一次性塑料杯，底部剪三四个洞，代替花盆，这种“花盆”有几个好处。一是装土少，干湿交替快，不会因为土

壤长时间过湿而导致插穗烂掉。插入准备好的土壤中，浇透水。

常春藤喜欢光，也比较耐阴，在半光条件下培养节间会比较短，叶形多一致，叶色也鲜明，扦插后放置在明亮散光位置，保持15到20度左右温度，三周左右可以生根。

常春藤浇透水后，置于无直射阳光的明亮处即可，刚开始几天可以两天左右浇一次水，大概一个星期之后，就可以逐步减

少浇水的次数，待观察到土稍干之后再浇，注意不能让土完全干透。

常春藤撬插繁殖方法就是在生长季节用带气根的嫩枝插最易成活，插后搭塑料薄膜拱棚封闭，并遮荫

杜鹃花组织培养技术

杜鹃花为杜鹃花科杜鹃花属常绿或落叶小灌木，具有品种多、开花早、花色丰富、花期长等特点。近几年，由于扦插繁殖技术的发展，我国杜鹃花产量有了提高。但是，名贵品种因母本少、繁殖系数低，仍不能满足社会需要。而组织培养正是实现杜鹃花工厂化育苗的有效措施。下面将其简单介绍如下：

一、杜鹃花组培的基本技术环节

杜鹃花组织培养，通常使用的外植体为茎尖、茎节和花蕾等。因花蕾的分化较为困难，周期长；茎尖的取材受到一定限制，故国内多采用茎节为初代培养的外植体。

杀菌处理时，杀菌能力较强的升汞（氯化汞）易造成外植体材料的褐变死亡，不宜使用。试验表明，采用饱和的次氯酸钙液上清液或5％的次氯酸钠液作为灭菌剂，效果较好，处理时间为15至20分钟。为加强灭菌效果，还可加入1％的克菌丹或0.1％的吐温－20（山梨糖醇）配合使用。材料灭菌前的预处理，通常采用70％酒精浸泡，不超过30秒。此外，用中性洗涤剂进行材料的预处理，亦可有效降低其灭菌后的污染率。外植材料灭菌流程为：洗衣粉液浸泡20分钟?流水冲洗至清?70％酒精浸泡30秒?灭菌水冲洗1分钟?5％次氯酸钠浸泡15分钟?灭菌水漂洗3次，每次1分钟。如此，可将外植体污染率降低到15％以下。

杜鹃花组培所用培养基，为Andeson改良MS培养基：将MS培养基中的硝酸铵和硝酸钾用量分别减至1／4，取消了碘化钾成分，铁盐的用量增加一倍。因杜鹃花科植物原产于高山酸性土壤，培养基的pH值宜为5.0至5.4。培养室温度25℃，光照强度3000勒克斯，光照时间12至14小时。

杜鹃花在诱芽培养中使用的激素较一般植物有异，需要活性较强的细胞激动素类物质，才能达到满意的效果。试验表明，使用ZT的诱芽效应最为显著；添加KT的处理几乎无丛芽或侧芽发生，仅是原茎尖的伸长；而选用6－BA处理，则导致培养材料的褐变加剧，效果反不如对照。此外，在其后的增殖培养中，杜鹃花对细胞激动素种类的要求，仍以添加ZT为好。

国外在杜鹃花的组培中多使用2ip作为外源细胞激动素，效果较ZT好。但从经济的角度考虑，仍推荐使用ZT。

二、杜鹃花的初代和继代增殖培养

杜鹃花初代诱芽培养，NAA浓度不得超过0.1mg／L，ZT用量的增大对诱芽效应有明显促进作用。但提高ZT浓度时，NAA浓度不宜同步增加，ZT／NAA值较大为好。从经济培养的意义出发，初代培养的激素配比以ZT5＋NAA0.01（mg／L）为宜，培养1个月左右时，诱芽率即可达100％，诱芽系数6.5。

杜鹃花继代增殖培养，对细胞激动素要求比初代培养有所下降。虽然增殖效应仍随ZT用量的增加而上升，但已不如初代培养时那么明显。此外，用于增殖培养的材料性质不同，其增殖效应也不尽相同，品种间亦存在显著的差异性。供试品种中，‘小桃红’以采用丛芽为增殖培养体时的增殖系数较高（7.6）；而‘花春雨’则反之，以取用芽条时的反应为佳（7.5）。

杜鹃花组织培养，从接种到诱芽产生，所需的时间明显长于月季和菊花等，故其继代增殖培养的周期也较长。试验中分别以30天和45天为培养周期进行了统计，在各激素水平配比处理中，其增殖芽总数，培养45天要比培养30天的高出50％至80％。所以，杜鹃花组培过程中，过于频繁地切割、转换培养，反达不到快繁的目的。

三、试管苗的生根培养及移栽

杜鹃花的生根培养虽不十分困难，但对培养基的要求仍与一般植物不同。其一，基本培养中无机盐大量元素的用量不能减半；其二，蔗糖的用量仍为30g／L，生长素NAA的添加量以1.5至2.0mg／L为好，培养45天时的生根率为60％左右。

供生根培养的试管苗，要求高15厘米以上，具7片以上真叶，发育健壮。生根培养2周后始见发根，6周时达最高生根率。试验中曾发现，在增殖培养过程中用KT或6－BA取代ZT时，虽诱芽、增殖效应较差，但芽条发育较粗壮。因此，在增殖培养达到一定群体数量后，用KT或6?BA进行继代培养处理，可使生根率和移栽成活率明显提高。此外，在生根培养基中添加2g／L的活性炭，可使试管苗个体发育显著增强，1个月后生根率可达到90％以上。

国外的研究资料表明，某些常规繁殖（扦插）极难生根的植物，经组织培养后获得的试管苗，生根会容易很多。有些可不经生根培养直接移植到生根介质中，生根率可达100％，3至4周后即可移入温室进行盆栽。这种生根介质为泥炭土、蛭石、珍珠岩的混合物，pH以4至4.5为宜。

生根试管苗的移栽入土，栽培基质为1∶1的泥炭生＋蛭石混合物。表层要求过筛，以利根系附着；下层铺粗粒，以利基质渗水。移栽时用镊子去掉根部附着的培养基（不可损伤根系）。用镊尖将基质拨一小洞，把根系放入，覆土，轻轻压实，浇足水。试管苗移栽成活的关键是保证一定的温、湿条件，移栽环境和试管培养时的条件相差悬殊，常造成移栽苗生长不适或死亡。

试管生根苗的移栽虽然在全年均可进行，但在不具备生根室的情况下，仍以春、秋两季进行较为稳妥方便。

四、组培技术在杜鹃花新品种选育中的应用

试验初期，鉴于杜鹃花外植体灭菌困难，可供试验的接种群体太小，不能满足正常试验的进行。为尽快筛选出合适的培养基配方及相应的培养条件，笔者结合杂交育种，采用杂交种子试管发芽的方法，再用试管实生苗的上胚轴为外植体进行研究，取得了事半功倍的效果。笔者发现，杜鹃花的杂种实生苗常规播种繁殖需3至5年才能开花，而经上胚轴培养的杂种实生苗，移栽后第二年即可开花，大大缩短了杂种实生苗的童期，对加快显花、结果类植物的育种进程具有重要意义。

一般来说，种子的灭菌处理较其他器官或组织容易得多。杜鹃花杂交种子的灭菌处理为：70％酒精表面浸泡1分钟，灭菌水漂洗后转0 ．1％升汞液浸泡10分钟，灭菌水漂洗3次，每次1分钟以上。灭菌后再剖实取籽、接种培养，接种两周始见发芽。出苗后取用上胚轴进行诱芽快繁，繁殖系数较高。成苗后，可取茎尖或茎节再培养，培养条件和方法同前。国内组织培养涉及新品种选育的不多，特别是在观赏园艺植物方面。从发展的角度看，组培技术要保持较强的生命力，就不该离开新品种的选育。因此，有机地将组培技术与杜鹃花新品种选育结合起来，对提高绿地植物景观的建设水平、促进杜鹃花的产业化发展，都是十分有益的。